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PCR實驗室分區能杜絕汙染嗎?分3區還是4區?

文章作者:pcr實驗室建設 發布時間:2020-11-23 17:24:06 瀏覽次數:0
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  目前PCR實驗室建設要求至少應該分為三個區域,即試劑準備區、核酸製備區和PCR擴增區,如果要對擴增產物進行開放性鑒定,如雜交、電泳等操作,原則需要增加第四個區。實驗室分區的主要目的是避免純化核酸和擴增產物逆向汙染前一個區域,但多年的經驗表明,無論是三區還是四區的設置,似乎都沒有完全杜絕實驗室汙染的發生。反而羅氏COBAS“一體機”引入實驗室後,乙肝20IU/ML的敏感性能夠長期保持良好,極少有係統汙染的發生,實驗室分區的意義受到一定程度的質疑!仔細對比就不難發現,羅氏COBAS並不能避免樣本交叉汙染,因為這一環節是由實驗室工作人員完成的,是管理問題而不是檢驗問題;COBAS在核酸製備過程中,經常發生核酸純化的Tip頭吹出氣泡和氣泡破裂的情況,雖然這種情況並不常見,但核酸純化和試劑分配共用一個空間是事實,有研究報道,COBAS檢測28個樣本,有2個汙染(JCM, 2011,P2854-2858),樱桃短视频入口也從21個陰性樣本中發現一個汙染,COBAS的汙染就像普通實驗室一樣存在,但令人驚奇的是,從未像普通實驗室那樣發生係統性汙染,但有一點可以說明,氣溶膠或許並不是實驗室汙染的主要原因。

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  分析我國大多PCR實驗室的檢測項目不難發現,近80%的實驗室采用熒光PCR試劑盒進行臨床檢測,即這部分實驗室不存在開放性核酸鑒定環節,試劑工作液的配製多在核酸製備完成後進行,依存“試劑配置與PCR擴增之間的時間越短越好”的原則,多數實驗室的試劑配製均在核酸製備室完成,也就是說,試劑配製室的存在基本被忽視,了解了羅氏COBAS的操作方式,這種做法便顯得無可厚非!核酸製備完成並加入PCR反應液後,移管到擴增室,由於采用封閉核酸鑒定的方法,這樣擴增室的設置也同樣顯得多餘!以羅氏COBAS為鏡,臨床PCR實驗室是否分區便顯得無足輕重了!但這並不是說PCR實驗室不需要分區,因為儀器自動化控製的機械臂,與實驗室操作人員的操作習慣和對規則的執行力是有著本質差別的!這或許就是經過嚴格分區後的實驗室,汙染同樣存在的主要原因!

  那麽PCR實驗室究竟應如何建設才能有利於汙染的預防和有效清除?

  其實汙染就是PCR擴增管中摻入了原來樣本不存在的擴增核酸,那麽這個不受歡迎的核酸是怎麽來到PCR擴增管裏的?如果排除試劑盒、儀器和人員操作等環節,核酸氣溶膠和灑落的樣本與核酸的清除是實驗室建設應該重點考慮的環節。

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  實驗室的建設首先要有通風設置,通風是PCR實驗室建設應該考慮的基本條件,如果采用封閉彩鋼板建設的實驗室,應進行壓差設置,即自試劑準備室、核酸製備室到擴增室依次呈負壓,但清潔新風應從室外引進,新風過濾網應定期更換,否則便成為汙染的來源。其次是實驗室牆麵和地麵具有防水功能,也就是牆麵和地麵可以水洗!每個房間設置地漏,方便“實驗室的清潔”,當實驗室汙染發生時,即可使用“水洗實驗室”的方法有效清除汙染,清除過程使用的是0.2%有效氯溶液,它不但有效斷裂核酸片段,而且還具有淬滅熒光基團,有利於PCR實驗室熒光本底的去除。但過量使用反而會影響試劑擴增效率。消毒液清洗後應該使用自來水或清潔水進行再次清洗,特別是設備表麵。實驗室空氣中的汙染清除,可以用有效氯溶液進行噴霧。

  總之,PCR實驗室過度分區和分割,不但浪費空間,影響人員操作,常常不利於汙染物的擴散和清除,相信在不久的將來,隨著試劑盒技術的發展,一個房間可實現PCR的試劑準備、核酸純化和PCR擴增的所有功能,而汙染的預防和清除也會顯得十分簡單。

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