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2020年了解PCR實驗室建設,阻止新冠病毒肆虐

文章作者:admin 發布時間:2020-11-26 18:01:32 瀏覽次數:0
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  一起來了解下PCR實驗室建設,進一步加強對新冠病毒檢測的防控認識,打贏防疫保衛戰。

  就新冠病毒核酸檢測來說,RT-PCR是目前使用廣泛和較準確的篩選和確認方法。就是通過擴增新冠病毒RNA,通過熒光探針實時檢測擴增產物,這種方法很靈敏,也能夠很好地定量。從目前來看,很多核酸檢測試劑盒的準確率都不錯,而檢測反應的準確程度取決於公布的基因序列的準確程度,以及PCR過程中引物、探針等的設計。當然,也可用測序方法更準確的檢測新型冠狀病毒,但是這對儀器要求高,速度也慢,不適合大批量篩查,所以說主流的檢測方法仍是實時熒光定量法。那在新冠病毒肆虐後,必然會引起相關機構單位著力建設規範的臨床PCR實驗室。

  標準的PCR實驗室可分成4個區域,按操作流程包括:

  核酸擴增區:提取純化的核酸上機擴增。

  試劑製備區:擴增試劑的配製、分裝、保存。

  產物分析區:擴增產物結果分析,生成報告。

  樣本前處理區:樣本分裝,核酸提取、保存。

  建設標準的臨床PCR實驗室,要避免檢測實驗中出現錯檢、漏檢,保證檢測結果的準確性,就要做到以下幾點:

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  一、 可靠的實驗儀器與試劑:

  (1)相關儀器

  (2)相關試劑:新冠病毒核酸檢測試劑或試劑盒、病毒核酸提取試劑或試劑盒、RT-PCR擴增試劑。

  (3)相關耗材:檢測中儀器配套耗材、人體安全防護工具、有效消毒液等。

  二、 嚴格的實驗操作流程:

  1、臨床PCR實驗室的技術人員必須進行上崗培訓,經培訓合格後才能從事臨床基因擴增檢驗的工作; 在實驗操作過程中,操作者必須戴手套、帽子,並經常更換,必要時需穿防護服、戴護目鏡等防護工具。清潔工作及時、正確。實驗工作結束後,必須立即對本區進行清潔。除常規的消毒液體對表麵進行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。

  2、嚴格控製進出實驗室的人員,與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室,有條件的情況下要設置獨立的通道和進出整個實驗區的門。在各個實驗區域使用帶有明顯區別標誌的工作服,當工作人員離開時不得將本區的工作服帶至其它區域; 盡量減少在實驗區內不必要的走動以減少交叉汙染的可能性。擴增產物分析區是最主要的擴增產物汙染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經消毒液浸泡消毒後在遠離實驗室的地方棄掉,用過的吸頭等一次性材料也應經消毒液浸泡消毒後統一處理,如焚燒等; 擴增產物分析區可能會用到某些可致基因突變和有毒物質,應特別注意實驗人員的安全防護。

  三、安全的PCR實驗室建設:

  1、普通PCR實驗室通常設置四個工作區,即試劑製備區、樣本製備區、核酸擴增區、產物分析區。符合要求的臨床PCR實驗室在試劑準備區、樣本製備區、產物分析區等三個或四個區域在物理空間上必須是完全獨立的,始終處於完全分離的狀態,不能有空氣直接相通。在可能出現汙染的區域安裝排風扇,使氣流按照試劑準備區→樣本製備區→擴增及產物分析區流動。

  2、隨著核酸檢測方法的優化和實驗儀器的功能強化,PCR實驗走向了自動化和高通量,這大大降低了病毒檢測的時間、提高了檢測的效率,也改變了普通PCR實驗室建設的平麵布局。如全自動定量PCR實驗室可設置為試劑製備區、樣本處理區、核酸擴增和產物分析區,後兩個區合並(用於新冠病毒檢測的PCR實驗室)。一體化自動化PCR實驗室設試劑製備和自動檢測區,後三個區合並。

  NO.1建設要點:

  ① 氣流走向:試劑製備區和樣本處理區宜微正壓,可以防止外界DNA或RNA包裹的氣溶膠進入,造成汙染,試驗區可通過控製進風量大於排風量達到正壓效果。

  核酸擴增區和產物分析區宜微負壓,可以防止含核酸的氣溶膠擴散出去造成汙染,試驗區可通過控製進風量小於排風量達到負壓效果。

  PCR實驗室整個區域應建立一個整體緩衝走廊,每個獨立操作區在入口處設置有緩衝區,減少室內外空氣交換,同時各區可通過氣壓調節,建緩衝區比專用走廊在減少氣體交換上更有意義。在實驗區安裝風速可調的回風口,空氣通過回風口換氣,使實驗過程中試劑和樣本免受氣溶膠微粒的汙染同時降低擴增產物對實驗人員和環境的汙染風險。

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  ② 消毒:在各個實驗區和緩衝區頂部及傳遞窗內部安裝紫外燈,用於實驗環境消毒。

  ③ 傳遞窗:試劑和樣本在各個實驗區之間通過機械連鎖的不鏽鋼傳遞窗傳遞,保證樣本和試劑在傳遞過程中不受汙染。

  ④ 生物安全:按照新型冠狀病毒實驗室生物安全指南規定,該病原體暫按照病原微生物危害程度分類中第二類病原微生物進行管理,核酸提取應當在生物安全二級實驗室進行,同時采用生物安全三級實驗室的個人防護,並在生物安全櫃(最好是B2型的,可避免提取的核酸在櫃內反複循環,造成標本間交叉“汙染”,出現假陽性結果)中操作。

  NO.2實驗區應控製:

  1、絕對負壓(防止室內潛在汙染物外泄);

  2、定向氣流(氣流從低汙染區流向高汙染區);

  3、無害外排(外排氣流經高效過濾器過濾並做高空排放)


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